Desarrollado un nuevo método para caracterizar la coccidia en aves de corral

 

  • La coccidia es una patología parasitaria que afecta gravemente a las aves de producción y con importantes repercusiones económicas. Una detección rápida, temprana, fiable y que tipifique con agilidad el tipo exacto de parasito causante facilitaría sin  duda el control, y más en el contexto actual que muchos coccidiostatos / coccidiocidas están siendo prohibidos por los reguladores bajo el enfoque “Una sola salud”.
  • La investigación puede conducir al desarrollo de otros ensayos de la industria basados en la citometría de flujo.

 

La Universidad Estatal de Carolina del Norte completó recientemente un proyecto de investigación en el que los investigadores probaron la validez de un método novedoso para la enumeración y caracterización de la coccidia en aves de corral, según la U.S. Poultry & Egg Assn. (USPOULTRY) y la Fundación USPOULTRY.

La Dra. Rocío Crespo, del Departamento de Salud y patobiología de Carolina del Norte, y sus colegas se propusieron desarrollar un método de diagnóstico basado en citometría de flujo, y que no requiriese anticuerpos, para la tipificación y especiación simultáneas de protozoos de coccidiosis.

En un resumen de la investigación, Crespo dijo que un diagnóstico preciso, rápido y confiable de Eimeria a nivel de especie es todo un reto, pero muy necesario. En la actualidad, señaló que hay muchas maneras para poder distinguir entre las especies de estos protozoos, incluyendo la morfología de los ovocitos, el período de pre-manifestación y el sitio de infección. Sin embargo, estos métodos son costosos en mano de obra, consumen mucho tiempo y no son confiables, particularmente en casos de infección mixta por Eimeria.

 

Según Crespo, numerosos enfoques moleculares han sido considerados y evaluados con relativo grado de éxito. Mientras que los ensayos cuantitativos de reacción en cadena de la polimerasa (qPCR), capaces de tipificar Eimeria, han demostrado su validez, el alto coste de los reactivos empleados cuestiona la extensión de su uso en condiciones de campo o en laboratorios ordinarios.

Crespo, dijo que la citometría de flujo, un método automatizado para medir células individuales en suspensión, tiene el potencial de ser una excelente herramienta de diagnóstico para la tipificación de las diferentes especies de Eimeria mediante el análisis de la morfología de sus diferentes ovocitos (tamaño y granularidad).

 

Se llevó a cabo un proyecto para desarrollar un método de diagnóstico no basado en citometría de flujo y no anticuerpos para la enumeración simultánea y la especiación de protozoos de coccidia.

Para lograr este objetivo, el proyecto se dividió en tres objetivos específicos:

(1) caracterizar cada una de las poblaciones de Eimeria a nivel de especie,

(2) definir coordenadas de población distintas de cada Eimeria sp. con el fin de especificar y cuantificar cultivos mixtos de Eimeria y

(3) evaluar la eficacia del método con muestras de campo.

 

Según Crespo, el equipo de investigación fue capaz de caracterizar cuatro especies de Eimeria (E. acervulina, E. mitis, E. maxima y E. tenella) en un analizador de citometro de flujo BD LSRII mediante el uso de trazado de datos de dispersión de luz simple. Dijo que no era necesario realizar procedimientos especiales de tinción o etiquetado de anticuerpos para resolver estas poblaciones.

La clasificación de poblaciones mixtas tuvo éxito para los cuatro Eimeria sp. utilizando el clasificador de células MoFlo-XDP.

Para la tipificación de ovocitos, se utilizó una vacuna y muestras fecales/yacija de lotes de aves de producción mezcladas con un número conocido de frijoles de conteo, explicó Crespo. La especiación y cuantificación de ovocitos se realizó utilizando la unidad de citometro de flujo. Se realizó la enumeración manual y la especiación por flotación y análisis de PCR para validar los recuentos, así como la pureza de cada especie de Eimeria identificada.

 

Aunque es necesario analizar y analizar muestras de campo adicionales, los resultados preliminares mostraron que el método era confiable para contar y especificar cuatro Eimeria sp. comunes de pollos, informó la Dra. Crespo.

La aplicación de citometría de flujo puede proporcionar un método de diagnóstico útil, preciso, rápido y automatizado para la enumeración y caracterización simultánea de coccidia en aves de corral, concluye en su estudio la Dra. Crespo.

A largo plazo, añadió que esta investigación puede conducir al desarrollo de otros ensayos de la industria, como

  • una identificación más precisa de los patrones de desprendimiento de Eimeria específica sp.,
  • la diferenciación entre ovocitos esporulados y no esporulados en las muestras e incluso
  • el reconocimiento de las cepas de Eimeria en los preparados de vacunas.

 

Para saber más:

-. A Novel Method for Enumeration and Speciation of Eimeria species of Coccidian Protozoa by Flow Cytometry

-. Coccidiosis en Avicultura.Com

Salud intestinal y coccidiosis

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